Рослинні та патогенні матеріали
Популяція картографування асоціації сорго, відома як популяція конверсії сорго (SCP), була надана д-ром Петом Брауном з Університету Іллінойсу (зараз в UC Davis).Він був описаний раніше і являє собою набір різноманітних ліній, перетворених на нечутливість до фотоперіоду та менший зріст, щоб полегшити ріст і розвиток рослин у середовищі США.У цьому дослідженні було використано 510 ліній із цієї популяції, хоча через погану схожість та інші проблеми з контролем якості не всі лінії були використані в аналізі всіх трьох ознак.Зрештою дані з 345 ліній були використані для аналізу відповіді на хітин, 472 ліній для відповіді flg22 і 456 для резистентності до TLS.B. cookieштам LSLP18 був отриманий від доктора Берта Блюма з Університету Арканзасу.
Вимірювання реакції MAMP
У цьому дослідженні використовувалися два різних MAMP: flg22 (каталог Genscript № RP19986) і хітин.Рослини сорго вирощували у вставках, покладених на квартири, заповнені ґрунтом (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) у теплиці.Рослини поливали за день до збору зразків, щоб уникнути додаткового зволоження листя в день збору.
Лінії були рандомізовані та з матеріально-технічних причин висаджені партіями по 60 ліній.Для кожної лінії було висаджено три «горщики» по два насіння на лінію.Наступні партії висаджували, як тільки попередня партія була оброблена, доки не було оцінено всю популяцію.Було проведено два експериментальних цикли для обох MAMP з повторно рандомізованими генотипами в кожному з двох циклів.
АФК аналізи проводили, як описано раніше.Коротко кажучи, для кожної лінії шість насіння було висаджено в 3 різні горщики.З отриманих сіянців за однорідністю відібрали три.Саджанці, які виглядали незвично або були значно вищими або нижчими за більшість, не використовувалися.Чотири листкові диски діаметром 3 мм були вирізані з найширшої частини 4-го листка трьох різних 15-денних рослин сорго.Один диск на листок з двох рослин і два диски з однієї рослини, причому другий диск стає контролем води (див. нижче).Диски окремо флотували на 50 мкл H2O у чорному 96-лунковому планшеті, закривали алюмінієвою кришкою, щоб уникнути впливу світла, і витримували при кімнатній температурі протягом ночі.Наступного ранку був виготовлений реакційний розчин з використанням 2 мг/мл хемілюмінесцентного зонда L-012 (Wako, № за каталогом 120-04891), 2 мг/мл пероксидази хрону (Тип VI-A, Sigma-Aldrich, № за каталогом P6782) і 100 мг/мл хітину або 2 мкМ Flg22.50 мкл цього реакційного розчину додавали до трьох з чотирьох лунок.Четверта лунка була пробним контролем, до якого додавали реакційний розчин, за винятком MAMP.Чотири порожні лунки, що містять лише воду, також були включені в кожну пластину.
Після додавання реакційного розчину люмінесценцію вимірювали за допомогою пристрою для зчитування мікропланшетів SynergyTM 2 з кількома виявленнями (BioTek) кожні 2 хвилини протягом 1 години.Зчитувач планшетів проводить вимірювання люмінесценції кожні 2 хвилини протягом цієї 1 години.Для отримання значення для кожної лунки була розрахована сума всіх 31 показань.Розрахункове значення відповіді MAMP для кожного генотипу було розраховано як (середнє значення люмінесценції трьох експериментальних лунок — значення імітаційної лунки) мінус середнє значення порожньої лунки.Значення порожніх лунок постійно були близькі до нуля.
Листові дискиNicotiana benthamiana, одна лінія сорго з високою чутливістю (SC0003) і одна лінія сорго з низькою чутливістю (PI 6069) також були включені як контролі в кожен 96-лунковий планшет для цілей контролю якості.
B. cookieпідготовка посівного матеріалу та інокуляція
B. cookieінокулят готували, як описано раніше.Коротко кажучи, зерна сорго замочували у воді протягом трьох днів, промивали, зачерпували в конічні колби об’ємом 1 л і автоклавували протягом години при 15 psi і 121 °C.Потім зерна інокулюють приблизно 5 мл мацерованого міцелію зі свіжої культуриB. cookieLSLP18 виділяють і залишають на 2 тижні при кімнатній температурі, струшуючи колби кожні 3 дні.Через 2 тижні зерна сорго, уражені грибком, висушували на повітрі, а потім зберігали при 4 °C до польової інокуляції.Один і той самий інокулят використовувався протягом усього випробування та оновлювався щороку.Для інокуляції 6–10 заражених зерен поміщали в мутовку рослин сорго віком 4–5 тижнів.Спори, вироблені цими грибами, викликали інфекцію в молодих рослинах сорго протягом тижня.
Підготовка насіння
Перед посадкою в поле насіння сорго було оброблено сумішшю фунгіцидів, інсектицидів і антидотів, що містила ~ 1% фунгіциду Spirato 480 FS, 4% фунгіциду Sebring 480 FS, 3% антидоту насіння Sorpro 940 ES.Потім насіння сушили на повітрі протягом 3 днів, що забезпечило тонке покриття цієї суміші навколо насіння.Антидот дозволив використовувати гербіцид Дуал Магнум як досходову обробку.
Оцінка стійкості до цільової плямистості листя
SCP було висаджено на Центральній дослідницькій станції сільськогосподарських культур у Клейтоні, штат Північна Кароліна, 14–15 червня 2017 року та 20 червня 2018 року за рандомізованою повною блочною схемою з двома експериментальними повторами в кожному випадку.Експерименти висаджували в 1,8 м одинарними рядами з шириною ряду 0,9 м з використанням 10 насінин на ділянку.По периферії кожного експерименту було висаджено два ряди, щоб запобігти ефектам країв.Експерименти були щеплені 20 липня 2017 року та 20 липня 2018 року, коли рослини сорго перебували на 3-й стадії росту. Оцінки проводилися за шкалою від одного до дев’яти, де рослини, які не виявляли ознак хвороби, оцінювалися як дев’ять і повністю. мертві рослини оцінювали як одну.Дві оцінки проводились у 2017 році та чотири зчитування у 2018 році, починаючи з двох тижнів після щеплення кожного року.sAUDPC (стандартизована площа під кривою прогресування захворювання) розраховували, як описано раніше.
Час публікації: 01 квітня 2021 р